2)RT-PCRによるRNAの検出

RT-PCRとは、RNAを鋳型としてcDNAを逆転写した後、特定のプライマーを用いたPCRにより増幅させる操作のことをいいます。このRT-PCRでRNAを検出できます。まずRNAのみを細胞から抽出し、抽出したtotal RNAからmRNAのみと選択的にアニールするプライマーとしてオリゴdTを用いて逆転写します。

最近では、 新型コロナウイルス 感染の検査として「 PCR検査 」がよく使用されていますが、この時には リアルタイムqRT-PCR法 が使用されているかと思います。COVID-19（SARS-CoV-2）は一本鎖RNAウイルスですので、ウイルスがもつRNAをcDNA（RNAから人工的に作成した相補的なDNAのこと）へと逆転写反応によって変換し、その後PCRで微量のDNAを感知できる量まで増幅させます。このときリアルタイムPCRでは、増幅されたDNAの二本鎖には「 蛍光色素 」をインターカレートさせたりすることができますので、この蛍光を検出することによってウイルスの有無を検査することができます。

※ちなみに、RT-PCRの RTはReverse Transcriptionであり、Real timeの略ではないので注意しましょう。qRT-PCRのqは「定量的な」という意味です。

2.RT-PCRの原理

RT-PCRでmRNAをcDNAに変換するためには、まずRNAのみを細胞から抽出する必要があります。その後、抽出したtotal RNAからmRNAのみを選択的に 逆転写 しcDNAとします。このときに、mRNAのみと選択的にアニールするプライマーとして オリゴdTプライマー （Tが重合したプライマー）が使用されます。

その後、目的配列を挟むように設計した一対のプライマーを用いた PCR により、目的のcDNA配列を増幅させ、電気泳動によって検出することもあります。

※真核生物のmRNAはその3'末端には、 ポリA鎖 （Aが20~200個重合した構造）が付加されていることから、これとハイブリダイズするオリゴdTプライマーを利用して、totalRNAからmRNAのみを逆転写することができます。

3)リアルタイムPCRによる定量PCR

1.リアルタイムPCRとはリアルタイムPCRとは、PCRによる増幅産物をリアルタイムでモニタリングすることで、増幅率に基づいて初期のDNAの定量ができる定量PCRのことです。リアルタイムRT- .

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